siRNA表达载体稳定沉默肺癌A549细胞MEKK3基因的细胞株建立

• 作者: 兰风华 沈瑞明 董荔红 钱凤英 黄俏佳
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: MEKK3基因 肺癌A549细胞株 基因表达 荧光实时定量PCR
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 316-322
• 分类号: R734.2|Q257|Q78
• 字数: 4640字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2010.04.007

摘要

目的 构建人MEKK3基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体并建立稳定沉默MEKK3基因表达的肺癌A549细胞克隆株.方法 设计并合成针对人MEKK3基因4个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,以BamH Ⅰ及Hind Ⅲ酶切位点分别克隆入pSilencer 4.1-CMV hygro载体,测序鉴定后以脂质体分别转染人A549细胞,Western印迹检测它们对MEKK3表达的抑制,并选择抑制效率最高的表达载体转染入A549细胞,潮霉素筛选后获得含该载体的抗性细胞克隆株,荧光实时定量PCR检测该细胞克隆株中MEKK3表达抑制.结果 测序鉴定表明4个MEKK3 siRNA表达载体正确无误;Western印迹结果显示对MEKK3的表达有抑制作用,其中pSilencer4.1-MEKK3 siRNA2的抑制率达84%;荧光实时定量PCR结果表明,pSilencer4.1-MEKK3 siRNA2可稳定沉默MEKK3 mRNA的表达,有效率达83%.结论 成功地构建了针对人MEKK3基因的siRNA表达载体,并成功地建立了能高效且稳定地沉默MEKK3基因表达的肺癌A549细胞克隆株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	兰风华	南京军区福州总医院分子医学研究中心	88	314	9.0	12.0
2	黄俏佳	南京军区福州总医院分子医学研究中心	10	31	3.0	5.0
3	董荔红	南京军区福州总医院分子医学研究中心	10	14	3.0	3.0
4	沈瑞明	南京军区福州总医院分子医学研究中心	2	1	1.0	1.0
5	钱凤英	南京军区福州总医院分子医学研究中心	3	3	1.0	1.0