过表达和敲除沉默信息调节蛋白6质粒的构建及稳定肺癌A549细胞株的筛选

• 作者: 付佳美 吴爱鲁 周子洋 宋晓 宋晓婷 张春燕 梁世雄 赵志鹏
• 来源期刊: 广西医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 沉默信息调节蛋白6 基因过表达 基因敲除 肺癌A549细胞
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 论著·基础研究
• 页码范围: 934-938,943
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 5767字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11675/j.issn.0253-4304.2018.08.19

摘要

目的 构建过表达和敲除沉默信息调节蛋白6(SIRT6)基因质粒,并筛选过表达和敲除稳定肺癌A549细胞株.方法 采用PCR技术扩增SIRT6基因序列,通过中间质粒pSK连接在慢病毒质粒CD513B上,鉴定正确后进行慢病毒包装,收集含慢病毒颗粒的上清感染A549细胞,加入嘌呤霉素筛选出过表达SIRT6基因的稳定细胞株,蛋白质印迹法检测细胞SIRT6蛋白表达水平.利用规律成簇间隔短回重复/Cas9基因编辑技术敲除SIRT6基因,确定敲除靶点位置为SIRT6基因的第一外显子和第二外显子,分别构建第一个显子,第二外显子的SIRT6-小向导RNA(sgRNA),将SIRT6-sgRNA连接到有Cas9的质粒CD513B上后转染A549细胞,加入嘌呤霉素筛选出转染成功的细胞,通过无限稀释法筛选出SIRT6敲除基因的A549细胞系,蛋白印迹法检测细胞SIRT6蛋白表达情况.结果 A549细胞的感染荧光效率接近100%,蛋白质印迹法检测过表达SIRT6基因A549细胞的SIRT6蛋白呈高表达.DNA测序检测敲除SIRT6基因A549细胞系有移码突变,蛋白质印迹法检测无SIRT6蛋白表达.结论 成功构建过表达和敲除SIRT6基因质粒,并筛选出过表达和敲除SIRT6基因的稳定肺癌A549细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周子洋	广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部	2	15	1.0	2.0
2	宋晓	上海市肺科医院放疗科	2	15	1.0	2.0
3	吴爱鲁	广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部	3	15	1.0	3.0
4	梁世雄	上海市肺科医院放疗科	2	15	1.0	2.0
5	付佳美	上海市肺科医院放疗科	1	0	0.0	0.0
6	宋晓婷	广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部	3	7	2.0	2.0
7	赵志鹏	上海市肺科医院放疗科	1	0	0.0	0.0