MEKK3基因siRNA重组腺病毒表达载体的构建及其对胃腺癌AGS细胞MEKK3的表达抑制

• 作者: 兰风华 董荔红 钱凤英 黄俏佳
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺病毒载体 小干扰RNA MEKK3基因
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 转化医学研究
• 页码范围: 334-339
• 分类号: Q78
• 字数: 4632字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2011.04.011

摘要

目的 构建人MEKK3基因的小干扰RNA(siRNA)重组腺病毒载体表达载体,观察其在胃腺癌AGS细胞中对MEKK3的表达抑制.方法 设计并合成针对人MEKK3基因3个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,以MluⅠ及XhoⅠ克隆入pRNAT-H1.1/Adeno穿梭载体中,得到的质粒用PmeⅠ线性化后在大肠埃项菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组.卡那霉素筛选后,用PacⅠ酶切鉴定.鉴定正确的质粒经PacⅠ酶切、乙醇沉淀后转染293A细胞,包装得到具有感染能力的pAd-MEKK3-siRNA重组腺病毒.病毒体外转导人胃腺癌AGS细胞,Western印迹法检测其对MEKK3蛋白表达的抑制.结果酶切和测序鉴定表明3个MEKK3 siRNA重组腺病毒表达载体正确无误.Western印迹检测结果显示3个pAd-MEKK3-siRNA重组腺病毒表达载体中有两个可有效地抑制胃腺癌AGS细胞中MEKK3基因的表达,其中以pAd-MEKK3-siRNA3的抑制作用最显著,有效率达89 %.结论 成功构建了针对MEKK3基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步研究MEKK3基因在人胃腺癌AGS细胞中的作用和功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	兰风华	南京军区福州总医院分子医学研究中心	88	314	9.0	12.0
2	黄俏佳	南京军区福州总医院分子医学研究中心	10	31	3.0	5.0
3	董荔红	南京军区福州总医院分子医学研究中心	10	14	3.0	3.0
4	钱凤英	南京军区福州总医院分子医学研究中心	3	3	1.0	1.0