稳定表达人乳头瘤病毒(HPV)58型E6E7融合基因的B16细胞系的建立

• 作者: 于继云 李力 王鹤
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒58型 E6E7基因 稳定转染 小鼠黑色素瘤细胞
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1088-1092
• 分类号: R73.3
• 字数: 4486字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.12.008

摘要

目的:构建pIRES-neo-HPV58E6E7真核表达载体,稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,建立稳定表达HPV58E6E7基因的B16细胞系.方法:采用PCR方法扩增出HPV58E6E7融合基因的全长序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES-neo中,并加入酶切位点和6×his标签,构建重组真核表达质粒pIRES-neo-HPV58E6E7.利用阳离子脂质体介导法将其转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418加压筛选出稳定转染的阳性克隆.利用Western blot、流式细胞术、免疫荧光等检测方法验证HPV58E6E7融合基因在稳定转染的B16细胞株中的表达.结果:经PCR、限制性内切酶鉴定及测序分析,pIRES-neo-HPV58E6E7重组质粒构建正确,转染B16细胞株后,经过Western blot、流式细胞术和免疫荧光等检测显示B16细胞株能够稳定、高效表达HPV58E6E7融合基因,表明B16-HPV58E6E7稳定转染细胞系构建成功.结论:成功构建了pIRES-neo-HPV58E6E7真核表达载体,建立了可以高效、稳定表达HPV58E6E7融合基因的B16细胞系.该稳定转染细胞系的建立为进一步研究HPV58治疗性基因疫苗的功能提供了良好的靶细胞,为其在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李力		377	1810	20.0	26.0
2	于继云	军事医学科学院基础医学研究所	59	145	6.0	9.0
3	王鹤		45	164	7.0	11.0