副猪嗜血杆菌aroA基因自杀载体的构建

• 作者: 叶飞 孙慧玲 张培君 张莉 徐慧 王宏俊 贺云霞 黄秀芬 龚玉梅
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 农学
• 关键词: :副猪嗜血杆菌 aroA 自杀载体
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 20-22
• 页数: 3页
• 分类号: S852.61+2
• 语种: 中文

摘要

为了构建副猪嗜血杆菌aroA基因插入突变自杀载体,试验采用自杀质粒介导的同源重组方法首先构建了自杀质粒pSD,根据副猪嗜血杆菌aroA基因设计PCR特异性引物,上游引物5’末端加BamH I位点,下游引物5’末端加Sal I位点,PCR扩增aroA基因后连接到T载体,经酶切位点分析发现在aroA中有1个HindⅢ位点,将氯霉素表达盒通过该位点,构建T- aroA - cm载体,再通过BamH I和Sal I将aroA - cm定向克隆到自杀质粒pSD中.结果表明:成功获得aroA基因插入突变自杀载体.说明进一步进行同源重组,从而构建副猪嗜血杆菌aroA基因插入突变株.