利用DNA shuffling技术构建含5个cry基因的突变体库以筛选高毒力杀虫蛋白

• 作者: 张小琼 林拥军
• 来源期刊: 华中农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: DNA shuffling Cry蛋白 序列比较 突变体库
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 微生物学
• 页码范围: 13-17
• 分类号: Q78
• 字数: 4701字
• 语种: 中文

摘要

以改造合成的5个Bt基因(crylC*、cry2A*、crylAb、crylAc和fry9C*)为材料,利用DNA shuff-ling的体外分子进化技术构建1个含有1 000个重组基因克隆的大肠杆菌表达库;通过诱导表达重组蛋白.ELISA方法测定蛋白表达量,以棉铃虫(Helicoverpa armigera)为试验昆虫进行毒性试验.结果显示:重组克隆的蛋白毒性与阳性对照crylAc相比,增强的有122个,持平的有38个,有毒性但毒性降低的有232个,失去毒性的有608个;对这1 000个重组克隆进行了测序.比较了重组基因与原始基因的序列同源性,除去55个克隆未能找到其原始基因来源,将其余的945个重组克隆从5个Cry蛋白的核苷酸编码序列的同源性出发,划分为源于crylC*、cry2A*、crylAb、crylAc和fry9C*的5个重组克隆类型.根据毒力变化分为毒力上升、持平、下降3组.对1 000个重组基因的氨基酸序列进行分析后发现,相对于毒力上升和持平组,5个毒力下降组的重组克隆间的氨基酸序列同源性最低.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张小琼	华中农业大学生命科学技术学院	2	7	2.0	2.0
2	林拥军	华中农业大学生命科学技术学院	26	291	8.0	16.0