农杆菌介导凝乳酶基因转化黑曲霉载体的构建

• 作者: 张旭 李杰 李璐
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 凝乳酶 黑曲霉 潮霉素 同源重组
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 8-12
• 分类号: Q784
• 字数: 2801字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2011.04.088

摘要

目的:研究针对黑曲霉中高表达的糖化酶基因( glaA)位点,构建含有潮霉素抗性的农杆菌介导的牛凝乳酶基因转化黑曲霉基因置换载体,并在潮霉素基因两端设计了正向重复序列,使在后续的研究中消除抗性基因成为可能.方法:将glaA上游( Gla5)和下游(Gla3)片段作为同源臂,通过重叠延伸PCR技术连接在Cym基因两端构成GlaA5-Cym-GlaA3( CYM)片段,并在潮霉素基因下游引入与Cym基因下游方向相同的Gla3,通过中间载体获得GlaA5-Cym-GlaA3-hph-Gla3结构.结果:将上述结构克隆至在T-DNA区内只含有多克隆位点的Ti质粒载体pSZA,经过酶切鉴定,成功获得载体pSZH-CYM.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李杰	东北农业大学生命科学学院	193	1723	20.0	30.0
2	张旭	东北农业大学生命科学学院	47	287	9.0	15.0
3	李璐	东北农业大学生命科学学院	31	136	6.0	11.0