鸭肝炎病毒现场分离株单克隆抗体的研制

• 作者: 向双云 周珍辉 周育森 张浩 曹授俊 曹金元 李玉冰 杨久仙 田璐 陈万荣
• 来源期刊: 湖南农业大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭肝炎病毒 单克隆抗体 间接ELISA法 中和试验
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产
• 页码范围: 78-81
• 分类号: S858.32|S855.3
• 字数: 4099字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1238.2011.00078

摘要

为有效防治鸭肝炎,建立特异性强、敏感性高、简便快速的DHV检测方法,对分离的DHV进行纯化,并制备单克隆抗体.鸭胚尿囊液中的DHV经冻融、氯仿反复处理、PEG浓缩和超速离心纯化后,免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术,通过间接ELISA法筛选及多次亚克隆,成功获得8株阳性杂交瘤细胞,分别命名为DHV-1、DHV-6、DHV-7、DHV-8、DHV-9、DHV-10、DHV-11和DHV-12,并制备出腹水.8株单抗腹水经ELISA法检测,DHV-7、DHV-8的效价为1:2 000;DHV-6、DHV-10的效价为1:8000;DHV-1、DHV-9、DHV-11和DHV-12的效价为(1:32000)～(1:512000).抗体亚类鉴定,DHV-6、DHV-7、DHV-8、DHV-10为IgG1;DHV-1、DHV-12为IgG2a;DHV-2、DHV-9、DHV-11为IgG2b.上述抗体均为k链.特异性鉴定表明,上述单克隆抗体只能与从尿囊液中纯化的DHV病毒包板反应,与非DHV抗原无反应.鸭胚中和试验及雏鸭保护试验结果表明,DHV-6、DHV-7、DHV-9、DHV-10具有较好的中和活性,并对雏鸭有不同程度的保护作用.