抗CPV-2a单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

• 作者: 史利军 曾妮 李刚 王净 王慧文 王鹏 穆秀明 高志花
• 来源期刊: 基因组学与应用生物学
• 学科: 农学
• 关键词: 犬细小病毒 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 技术改进
• 页码范围: 357-363
• 分类号: S852.5
• 字数: 5830字
• 语种: 中文

摘要

犬细小病毒病是危害养犬业的重要传染病之一,患病犬难以治愈。单克隆抗体治疗此病效果明显,本文介绍了制备抗CPV-2a单克隆抗体的方法。用纯化的犬细小病毒（canine parvovirus,CPV）2a型分离株免疫新西兰大白兔和Balb/c小鼠制备抗CPV-2a多克隆抗体及单克隆抗体。经亚克隆得到1H9、2B5、2B7和2C7共4株单抗,Western blotting鉴定单抗的免疫反应性;间接ELISA方法检测单抗的特异性。为了快速对犬细小病毒病作出诊断,建立了CPV-2a双抗夹心ELISA方法。兔多抗作为捕获抗体,鼠单抗作为示踪抗体,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG作为检测系统;捕获抗体和示踪抗体最佳稀释度分别为1：800和1：2000;检测系统最佳稀释度为1：4000。结果表明：所得4株单抗与pET-32a-VP2蛋白发生特异性反应,且与狂犬病毒（RV）、犬温热病毒（CDV）不交叉反应;建立的双抗夹心ELISA方法对病毒的最低检出量为4.375μg/mL,与美国RB试剂盒相比,符合率为95%。单抗制备为犬细小病毒病的治疗奠定了基础;双抗夹心ELISA方法的建立为疑似粪便样本提供了简单、快速和可靠的检测手段。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李刚	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	111	742	14.0	23.0
2	王鹏	河北北方学院农林科技学院	75	253	9.0	12.0
3	王净		1	4	1.0	1.0
4	曾妮	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	10	67	4.0	8.0
5	穆秀明	河北北方学院动物科技学院	36	222	9.0	13.0
6	高志花	河北北方学院动物科技学院	27	104	6.0	8.0
7	王慧文	河北北方学院动物科技学院	22	175	8.0	12.0