Akt3稳定表达细胞株的建立及其对MDA-MB-231细胞增殖的影响

• 作者: 韩俊永 黄俏佳
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 蛋白激酶Bγ 基因克隆 基因转染 基因表达 四唑盐比色测定
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 489-493
• 分类号: Q78
• 字数: 3680字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2011.06.005

摘要

目的 构建人蛋白激酶Bγ(Akt3)基因编码区序列(cDNA)的真核表达载体、建立其稳定表达细胞株并观察其对MDA-MB-231细胞增殖的影响.方法 从流产胎儿脑组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增Akt3 cDNA的全长序列后克隆入pEGFP-N2质粒中,构建成Akt3基因真核表达载体,然后转染入MDA-MB-231细胞中,新霉素筛选稳定转染细胞克隆,通过MTT实验,研究转染Akt3基因前后细胞增殖的变化.结果 重组载体经酶切鉴定和测序证实目的 基因正确无误.Western印迹检测结果显示AKT3融合蛋白在MDA-MB-231细胞中表达良好,而转染空载体及未转染细胞对照中未见有此融合蛋白质条带;MTT结果显示AKT3表达上调的稳定克隆组,其增殖活性显著高于空载体稳定转染细胞组及未转染亲代细胞组,差异具有统计学意义(P＜0.01),而后两者差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Akt3过表达可增强MDA-MB-231细胞的增殖.