胃癌SGC-7901细胞中人RIPX-GFP融合蛋白载体构建及表达定位

• 作者: 周颖 姜佩佳 王孝会 王桂玲 陈薇
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RIPX 绿色荧光蛋白 蛋白表达及定位 胃癌SGC-7901细胞
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 36-39
• 分类号: R34
• 字数: 2715字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2011.01.008

摘要

目的 构建真核表达载体pEGFP-RIPX,并鉴定RIPX在胃癌细胞中的定位,并检测外源性RIPX的表达.方法 以pBluescriptR–RIPX为模板,采用PCR 法进行人RIPX 编码序列(ORF)的扩增,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中.将pEGFP-RIPX质粒瞬时转染到胃癌SGC-7901细胞中,用Western印迹方法 检测GFP-RIPX融合蛋白的表达;用激光扫描共聚焦显微镜观察RIPX的定位.结果 人的RIPX 编码序列被成功克隆至真核表达载体pEGFP-C1中;证实了GFP-RIPX融合蛋白的表达;转染pEGFP-RIPX 后,在胃癌SGC-7901 细胞胞质内可见明亮的绿色荧光.结论 成功地构建了pEGFP-RIPX 载体,鉴定了外源性RIPX 的表达;同时证实在胃癌SGC-7901 细胞中RIPX主要定位于细胞质,为进一步研究RIPX 的生物学特性及其信号转导通路奠定了基础.