猪附红细胞体ORF4基因片段的人工合成及基因表达

• 作者: 刘建柱 刘永夏 刘海涛 周栋 张利 张璐 成子强 柴同杰 陈甜甜
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪附红细胞体 ORF4 全基因合成 表达
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 287-290
• 分类号: Q78
• 字数: 3014字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2011.04.005

摘要

目的 本研究通过人工合成猪附红细胞体ORF4基因,使其在大肠杆菌中高效表达.方法 选择GenBank注册的AJ504999序列的ORF4基因,应用Graphical Codon Usage Analyser选择大肠杆菌偏爱的密码子,改变基因的transl_table,设计并合成3对寡核苷酸链,用PCR-based accurate synthesis(PAS)法进行人工合成.经测序正确后,连接到表达载体PET28a,获得重组表达质粒PET28a/ORF4,导入大肠杆菌BL21(DE3),在30℃,IPTG终浓度1mmol/L的条件下诱导表达,经SDS-PAGE分析,在11 kDa附近出现目的片段.结果 结果表明ORF4基因在大肠杆菌中能够得到高效的表达,通过生物信息学软件分析表明,该蛋白存在19个配基结合位点;在21～22位氨基酸可能存在信号肽裂解位点;为胞内蛋白,没有糖基化位点.结论 ORF4基因能够在大肠杆菌中表达,推测其在M.suis蛋白质的形成,M.suis的生物功能方面有着重要的作用.