应用Red重组技术构建四环素抗性多基因串联表达载体

• 作者: 何彰华 叶丙雨 师明磊 张乐之 张彦 李德彬 王东 王洋 肖丽霞 范秋声 赵志虎 闫兴 黄芬
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 四环素抗药性 多基因串联表达载体 Red 重组 质粒 红霉素
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 754-757,799
• 分类号: Q78
• 字数: 3675字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2011.10.009

摘要

目的 构建一种四环素抗性的多基因串联表达载体.方法 设计同源臂引物,通过重叠延伸 PCR获取含四环素抗性基因的打靶序列,应用pKD46介导的Red重组系统,在DH5α内替换多基因串联表达载体pET-m28a( + )中的抗性基因序列;再利用同尾酶(isocaudarner)策略,将sfp和accA1两基因串联组合于pET-mt28a( + )中,并进行共表达鉴定.结果 获得了含四环素抗性的重组质粒pET-mt28a( + );构建了两基因串联重组质粒pET/sfp/accA1-mt28a( + ),且两基因能够在同一载体上协同表达.结论 成功构建了一种四环素抗性表达载体pET-mt28a( + ),并可介导多基因的协同表达,为红霉素合成通路在大肠杆菌中的重建奠定了基础.