抗Her-2抗体与人β防御素Ⅱ融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定

• 作者: 仝雷 张敏静 苏志坚 袁丰瑞 项琪 黄亚东
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人β防御素Ⅱ 人表皮生长因子受体2 融合蛋白 靶向作用
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 266-271
• 分类号: Q784|R966
• 字数: 4297字
• 语种: 中文

摘要

利用小分子泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)融合表达系统,在大肠杆菌Origami B(DE3)中表达人β防御素Ⅱ(human β defensin 2,HBD2)与抗人表皮生长因子受体2(Her-2)单链抗体(4D5 scFv)的融合蛋白.经20℃,1 mmol/L IPTG诱导24 h后,获得相对分子质量约为4l kD的SUMO-HBD2-4D5融合蛋白,为可溶性表达,表达量占菌体上清总蛋白的42.2%.利用组氨酸亲和凝胶色谱(Ni-NTA sepharose)、特异性SUMO蛋白酶(SUMO protease)酶切和分子筛(Sephadex G-25)联用的方法可获得纯度大于95%的目的蛋白HBD2-4D5,其最终得率达到15 mg/L.HBD2-4D5 200μg对金黄色葡萄球菌(ATCC25923)和大肠杆菌K12D31具有较明显的杀伤作用.免疫荧光分析结果显示,HBD2-4D5蛋白能结合于Her-2高表达的人乳腺癌细胞SK-BR-3表面.本实验表达的HBD2-4D5双功能蛋白具有较好的抗菌活性和特异性结合SK-BR-3表面Her-2的能力,为日后用于靶向治疗Her-2高表达的肿瘤疾病提供研究基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	袁丰瑞		1	0	0.0	0.0
2	张敏静		1	0	0.0	0.0
3	仝雷		1	0	0.0	0.0
4	苏志坚		1	0	0.0	0.0
5	项琪		2	18	1.0	2.0
6	黄亚东	医药生物技术研究开发中心基因工程药物国家工程研究中心	5	17	2.0	4.0