重组人抗-HBs单链抗体与白细胞介素2融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定

• 作者: 余宙耀 粟宽源 陈文吟 饶桂荣
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 单链抗体 白细胞介素2 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 153-155
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2516字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2004.02.022

摘要

目的探讨抗-HBs单链抗体与白细胞介素2融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定方法.方法将构建的目的蛋白表达工程菌M15[pQE-ScFv-IL-2]经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE及Western blot分析鉴定表达产物;再通过Ni2+离子金属螯合亲和层析和离子交换层析纯化目的蛋白;采用逐步透析法对纯化后的目的蛋白进行复性后,用间接ELISA实验和CTLL-2细胞增殖反应实验对其进行活性鉴定.结果 SDS-PAGE及Western blot分析结果显示有分子量约为43kD的重组蛋白表达,表达量可达18%;两步纯化后凝胶成像分析目的蛋白的纯度达到95%;复性后纯化产物的活性鉴定结果表明,重组抗体融合蛋白既能与HBsAg特异性结合,也能刺激CTLL-2细胞增殖.结论获得的抗体融合蛋白兼具亲本分子的双特异性,为慢性乙型肝炎及相关疾病的导向治疗研究打下了良好基础.