广州管圆线虫Asp-1基因的克隆表达及各虫期转录水平研究

• 作者: 何蔼 刘茜 刘静 曲振宇 李卓雅 杨潇 王琳 詹希美 陈婧
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 广州管圆线虫 天冬氨酰蛋白酶 原核表达 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏·基础研究论著
• 页码范围: 512-515
• 分类号: R383.1
• 语种: 中文

摘要

目的 构建广州管圆线虫天冬氨酰蛋白酶(Asp-1)基因的原核表达系统,研究该基因在各虫期的转录水平.方法 构建重组质粒pET-30a(+)-Asp-1,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达载体,经IPTG诱导表达后,Ni-IDA亲和层析纯化表达产物.通过以β-肌动蛋白为内参、以各期虫cDNA为模板的实时荧光定量PCR,研究该基因在各虫期的表达水平.结果 获得纯化的重组蛋白,相对分子质量约为43 000,与生物信息学分析预测结果一致.qRT-PCR显示该基因在三期幼虫中表达丰度最高,四/五期幼虫、成虫雄虫、雌虫依次降低.结论 Asp-1基因的表达丰度在三期幼虫中最高的实验数据与三期幼虫感染性最强的事实相符,提示天冬氨酰蛋白酶有可能是幼虫入侵宿主的关键酶,为后续广州管圆线虫虫体侵入宿主的机制以及宿主保护机制研究打下基础.