广州管圆线虫雌性成虫肌蛋白-1基因的克隆表达及免疫学效应分析

• 作者: 李海飞 李素丽 詹希美
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 广州管圆线虫 雌性成虫肌蛋白-1 基因克隆 原核表达 免疫诊断
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 563-567
• 页数: 5页
• 分类号: R383.1
• 字数: 4079字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.06.004

摘要

目的 对广州管圆线虫雌性成虫肌蛋白-1(Ac-fmp-1)基因的开放读码框进行克隆、表达及重组蛋白的免疫学效应分析,评价其重组蛋白在免疫学诊断中的应用前景.方法 逆转录聚合酶链反应扩增目的基因,克隆至原核表达载体pET-30a-c(+),重组质粒转化至大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍离子亲和层析(Ni-IDA)纯化分离表达产物.免疫印记(Western-blot)和酶联免疫吸附试验(ELISA)分析重组蛋白的免疫性.结果 广州管圆线虫Ac-fmp-1基因的编码区有1 251个碱基,编码417个氨基酸.原核表达载体pET-Ac-fmp-1构建成功,IPTG诱导表达获得了体外高效表达的重组融合蛋白,经亲和层析得到纯化蛋白.融合蛋白可被感染广州管圆线虫的SD大鼠血清及病人血清所识别;作为包被抗原用于ELISA检测大鼠血清其敏感性与特异性均为100％,与粗抗原无差别;检测广州管圆线虫病人血清敏感性为100％,与粗抗原有差别;检测其他寄生虫病人血清与正常病人血清其特异性为100％和98％,与粗抗原相比特异性较高.结论 广州管圆线虫Ac-fmp-1基因在原核表达系统获得高效表达,编码蛋白可能是虫体的重要抗原成分,在免疫学诊断方面有潜在的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	詹希美	中山大学中山医学院寄生虫学教研室	86	505	11.0	17.0
2	李海飞	南方医科大学附属深圳妇幼保健院中心实验室	17	148	7.0	12.0
3	李素丽	南方医科大学附属深圳妇幼保健院中心实验室	11	50	4.0	7.0