广州管圆线虫组织蛋白酶Z基因的原核表达及免疫学分析

• 作者: 于彦杰 何蔼 刘静 岳永亮 曲振宇 李卓雅 杨潇 王琳 程梅 詹希美
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 广州管圆线虫 组织蛋白酶-Z 生物信息学 原核表达 免疫诊断
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 810-813,817
• 分类号: R383.1
• 字数: 4225字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.09.004

摘要

目的 克隆并原核表达广州管圆线虫组织蛋白酶-Z基因,评价其融合蛋白在免疫诊断中的应用前景.方法 利用生物信息学分析工具,分析广州管圆线虫组织蛋白酶-Z的理化性质、结构与功能特征;克隆目的基因至原核表达载体pET30a(+),经PCR、双酶切鉴定后,IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE鉴定,融合蛋白用His-镍蛋白纯化柱纯化;ELISA检测融合蛋白作为诊断抗原的敏感性及特异性.结果 该蛋白理化性质较稳定,含有分泌型信号肽;含有构成半胱氨酸蛋白酶催化中心的Cys84、His232和Asn253三个氨基酸残基.成功构建了重组质粒且目的基因在E.coli BL21 中获得高效表达,经亲和层析获得了纯化的融合蛋白.融合蛋白可被其免疫的BALB/c小鼠血清及感染广州管圆线虫的小鼠血清识别;作为包被抗原用于ELISA检测小鼠血清其敏感性及特异性均为100%与粗抗原无差别,检测其他寄生虫病人血清及正常人血清其特异性分别为100%和97.4%与粗抗原相比特异性较高.结论 广州管圆线虫组织蛋白酶-Z与多个物种组织蛋白酶-Z 基因同源,是一种半胱氨酸蛋白酶,含有信号肽,可能是重要的虫体分泌排泄抗原成分,在广州管圆线虫病的免疫诊断方面有潜在的应用前景.