广州管圆线虫ASP基因的克隆及原核表达

• 作者: 于彦杰 何蔼 张美春 李卓雅 潘智华 甘明 詹希美 郭鹏娟
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 广州管圆线虫 天冬氨酸蛋白酶 基因克隆 原核表达 免疫性
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 471-474
• 分类号: R383.1
• 字数: 2521字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.05.017

摘要

目的 对广州管圆线虫ASP基因的完整开放读码框进行克隆、表达及重组蛋白的免疫性分析.方法 以广州管圆线虫幼虫cDNA文库中含有ASP基因的质粒为模板,扩增目的 基因,进一步将其克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中, 重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达, Ni-IDA亲和层析纯化表达产物.免疫印迹(Western blotting)分析重组蛋白的免疫性.结果 广州管圆线虫ASP基因的编码区含有366个碱基,编码121个氨基酸,相对分子量(Mt)为13 398.26Da.重组质粒pET-30a(+)-ASP构建成功,IPTG诱导获得可溶性表达的重组蛋白,经亲和层析获得的纯化蛋白可被广州管圆线虫病人血清识别. 结论广州管圆线虫ASP基因可在原核表达系统中获得具有免疫性的高效表达.