呼吸道合胞病毒F蛋白基因片段真核细胞表达纯化及其ELISA建立的研究

• 作者: 于庭 刘爱忠 包洪 尹文东 李艳蕾
• 来源期刊: 生物医学工程与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 呼吸道合胞病毒 重组蛋白 酶联免疫吸附分析法
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 272-276
• 分类号: R56
• 字数: 4385字
• 语种: 中文

摘要

目的 表达纯化人呼吸道合胞病毒(HRSV)F蛋白基因片段,建立间接夹心酶联免疫吸附分析法(ELISA),为进一步大量表达F基因、构建基因工程疫苗和快速临床检测奠定基础.方法 逆转录并扩增F基因中的F1片段,连接到载体中,转染真核细胞,诱导并纯化重组F蛋白.将纯化重组F蛋白免疫小鼠制备抗体血清,并建立间接夹心ELISA.通过100份标本,应用"金标法"对所建立的方法 进行验证.结果 成功获得F基因中F.片段的扩增产物,筛选阳性克隆,得到相对分子质量为45000的大最表达蛋白.确定了间接夹心ELISA的最佳反应条件和工作浓度;鼠抗F1IgG最佳质量浓度为3.2μg/mL,样品最佳反应时间为37℃70min,酶标兔抗鼠IgG最佳工作浓度为1:6000.与"金标法"对比,阳性样品的变异系数为3.2%～8.6%,阴性样品的变异系数为5.1%～8.3%,均小于10.0%,表明该方法 有良好的重复性.结论 构建的重组真核细胞能够大量表达F蛋白,纯化的F蛋白具有很好的免疫原性,制备的抗体血清用于ELISA能够得到准确的检测结果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于庭		61	297	9.0	14.0
2	尹文东		3	21	2.0	3.0
3	包洪		22	97	5.0	9.0
4	李艳蕾		7	4	1.0	2.0
5	刘爱忠		16	65	5.0	7.0