牛呼吸道合胞体病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

• 作者: 侯喜林 李艳婷
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 牛呼吸道合胞体病毒 G蛋白 多克隆抗体 单克隆抗体 DAS-ELISA
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 628-636
• 页数: 9页
• 分类号: R373.1
• 字数: 5856字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2017.07.011

摘要

目的 建立牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测方法.方法 以重组纯化的BRSV-G蛋白免疫家兔和小鼠,制备抗G蛋白的多克隆抗体(PcAb)和单克隆抗体(MAb),方阵滴定法优化DAS-ELISA方法抗体工作浓度及反应条件,并对其敏感性、特异性、符合率进行验证.结果 获得5株稳定分泌抗G蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分泌抗体亚类均为IgG1型κ链,Western blot、IFA试验表明PcAb和MAb均与G蛋白和BRSV发生特异性反应,MAb作为捕获抗体的最佳包被浓度为2.5 μg/mL,PcAb作为检测抗体最佳工作浓度为5 μg/mL,判定临界值为0.22,最低检测限为1.43 μg/mL,批内和批间重复性试验变异系数均小于10％,与常引起牛呼吸道疾病的几种病原均无交叉反应,与RT-PCR的敏感性、特异性、符合率分别为92.0％、100％、95.6％.结论 建立的检测BRSV的DAS-ELISA方法可用于临床样品的大规模检测,为BRSV疫情的监测和快速诊断奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	侯喜林	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	115	607	13.0	19.0
2	李艳婷	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	5	16	2.0	3.0