牛呼吸道合胞体病毒重组N蛋白间接ELISA方法的建立及应用

• 作者: 余丽芸 侯喜林 朴范泽 王红 翟延庆
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛呼吸道合胞体病毒 重组N蛋白 间接ELISA 初步应用
• 年，卷（期）: 2010,（20）
• 页码范围: 4303-4309
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.20.023

摘要

[目的]以纯化的牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)HJ株重组N蛋白作为包被抗原,对各项条件进行优化,确定判定标准,建立检测BRSV抗体的间接ELISA方法.[方法]将已构建的重组菌BL21(DE3)进行诱导表达,获得重组N蛋白.利用电洗脱法对表达产物进行纯化,并用Western blot对表达产物进行鉴定.以纯化后的重组N蛋白作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立检测BRSV抗体的间接ELISA诊断方法.[结果]成功表达并纯化了BRSV HJ株重组N蛋白,Western blot检测结果证明表达产物具有良好的反应原性.以重组N蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法.交叉试验结果表明重组N蛋白与牛无浆体病(Anaplasmosis)、牛传染性鼻气管炎(IBRV)和牛副流感(BPIV)阳性血清均不发生交叉反应.与中和试验(SNT)相比较,该方法的特异性、敏感性和符合率分别为85.0%、90.9%和87.7%.采用本试验建立的间接ELISA方法对黑龙江省的牡丹江,佳木斯、鹤岗和大庆4个地区牛场的600份牛血清进行了检测,结果表明,黑龙江省部分地区BRSV的抗体阳性率为27.33%.[结论]本研究建立的间接ELISA方法具有较好的特异性、敏感性和重复性,利用该方法初步证实黑龙江省部分地区存在牛呼吸道合胞体病.这一研究为牛呼吸道合胞体病诊断试剂盒的研制奠定了基础,并为该病的诊断与流行病学调查提供有效的技术手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余丽芸	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	126	465	10.0	16.0
2	侯喜林	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	115	607	13.0	19.0
3	翟延庆	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	12	62	5.0	7.0
4	朴范泽	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	87	746	16.0	22.0
5	王红	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	16	132	7.0	11.0