大菱鲆表皮蛋白质组双向电泳技术的建立及优化

• 作者: 周洲 薛宝贵 马爱军 黄智慧
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 大菱鲆 表皮组织 蛋白质 双向电泳
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 41-46
• 分类号: Q953|S965.399
• 字数: 5027字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7075.2011.02.007

摘要

通过对表皮蛋白质提取方法、不同裂解液配方、等点聚焦程序和上样量等条件的对比试 验,建立及优化了大菱鲆表皮组织蛋白质的双向电泳体系.试验采用改良的TCA/丙酮和超声波提取相结合的方法提取大菱鲆表皮组织的全蛋白,裂解液配方根据Bio-Rad公司推荐的进行调整,使用17 cm pH 4～7的IPG胶条被动水化上样,上样量为250μg.等点聚焦程序采用30 V线性6 h、250V线性2.5 h、500 V线性1.5 h、1 000 V快速2 h、4 000 V线性3 h、8 000 V快速3 h、8 000 V线性1 h、500V 24 h,凝胶银染后用Image Master 2D Platinum 7.0软件进行分析,最终得到较满意的双向电泳图谱,具有较高的分辨率和重复性,为大菱鲆蛋白质组学的进一步研究奠定了基础.