人肝癌PLC/PRF-5细胞中干细胞样细胞的分离及其特异性miRNAs的筛选

• 作者: 应敏刚 杨建伟 许扬梅 谢云青 郑秋红 魏植强 龚福生
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝癌 肝癌干细胞 microRNA 表达谱 免疫磁珠分选
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究收报
• 页码范围: 126-132
• 分类号: Q279|R392.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2011.02.002

摘要

目的:分选及鉴定人肝癌PLC/PRF-5细胞中的肝癌干细胞样细胞,研究其microRNAs(miRNAs)表达谱.方法:以ABCG2为表面标志,免疫磁珠法分选、流式细胞术检测ABCG2+和ABCG2-PLC/PRF-5细胞,观察ABCG2+与ABCG2-PLC/PRF-5细胞的琼脂克隆形成能力和接种NOD/SCID小鼠的成瘤能力.应用miRNA芯片筛选ABCG2+和ABCG2-PLC/PRF-5细胞差异表达的miRNAs,real-time PCR验证部分差异表达的miRNAs.结果:免疫磁珠分选的ABCG2+PLC/PRF-5细胞纯度可达(84.20±4.52)%.ABCG2+ PLC/PRF-5细胞比ABCG2- PLC/PRF-5细胞形成更多、更大的克隆集落(47.17±10.50vs23.33±7.31,P<0.05);NOD/SCID小鼠接种1x104个ABCG2+ PLC/PRF-5细胞即可成瘤,而ABCG2- PLC/PRF-5细胞至少需要5x10(5)个才可成瘤;5x10(5)个细胞时,ABCG2+ PLC/PRF-5细胞组的肿瘤体积显著大于ABCG2- PLC/PRF-5细胞组[(3.73±1.19)cm3vs(0.72±0.57)cm3,P<0.01],ABCG2+ PLC/PRF-5细胞和ABCG2- PLC/PRF-5细胞差异表达的miRNAs有20个:上调的13个,下调的7个;real-time PCR验证其中的hsa-miR-30a和hsa-miR-630的差异表达,其结果与miRNA芯片结果基本一致.结击:人肝癌细胞系PLC/PRF-5中ABCG2+细胞具有肿瘤干细胞的特性;ABCG2+和ABCG2- PLC/PRF-5细胞差异表达的miRNAs有20个,它们在肝癌发病中可能起重要的调控作用.