GST-pulldown体外研究LRP16与NF-KB/p65相互作用的功能表位

• 作者: 伍志强 李小雷 赵亚力 韩为东 马晓星
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: NF-κB/p65亚基 LRP16 功能表位 相互作用 GST-pulldown RHD结构域
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 623-626
• 分类号: Q78|Q52
• 字数: 3216字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2011.05.005

摘要

目的:构建核转录因子NF-κB/p65亚基的功能表位载体,采用GST-pulldown探究p65与LRP16体外相互作用的功能表位.方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-p65为模板,PCR扩增一组p65功能表位的基因片段,经测序后,克隆至pcDNA3-flag载体上,用BamH Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切重组质粒鉴定目的片段大小,然后采用GST-pulldown实验验证LRP16与p65之间的相互作用.结果:构建了p65的5个功能表位的表达载体且可用于体外转录翻译,GST-pulldown体外研究表明,p65蛋白N端RHD结构域是与LRP16相互作用所必需的,p65的RHD结构域的缺失完全消除了p65与LRP16的体外相互作用.结论:GST-pulldown实验验证了LRP16与p65存在体外直接相互作用,并具体分析了LRP16与p65相互作用的表位.