应用酵母双杂交方法筛选LRP16相互作用蛋白

• 作者: 伍志强 张燕 杨(契) 田丽媛 赵亚力 陈美霞 韩为东
• 来源期刊: 军医进修学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: LRP16 质粒 双杂交技术 基因文库
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 439-441
• 页数: 3页
• 分类号: R373
• 字数: 3322字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-1139.2007.06.016

摘要

目的:应用酵母双杂交技术筛选人乳腺癌细胞MCF-7中可与LRP16相互作用的蛋白.方法:将诱饵质粒pGBKT7-LRP16、MCF-7双链cDNA文库片段及线性化质粒pGADT7-Rec共转化AH109酵母菌,营养缺陷型培养基(SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade)筛选阳性菌落.提取阳性克隆质粒进行PCR,将PCR产物测序,并将酵母质粒转化感受态大肠杆菌Top10获得与诱饵质粒有相互作用的单个文库质粒,测序后回复验证其在酵母中的相互作用.结果:获得8个与LRP16相互作用的候选蛋白,选取4个在酵母中进行回复验证,其中有3个可生长出阳性克隆.结论:应用酵母双杂交技术筛选出一族功能基本明确的可与LRP16相互作用的候选蛋白,为研究LRP16的病理生理功能和分子机制奠定了基础.