慢病毒介导的RNA干扰对小鼠胰腺星状细胞中半乳糖凝集素-1基因沉默效应的研究

• 作者: 卫积书 张静静 汤东 苗毅 蒋奎荣 袁中旭 陆子鹏
• 来源期刊: 外科理论与实践
• 学科: 医学
• 关键词: 胰腺星状细胞 半乳糖凝集素-1 慢病毒 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 455-460
• 分类号: R657.5
• 字数: 4074字
• 语种: 中文

摘要

目的:评价慢病毒介导的RNA干扰技术对小鼠胰腺星状细胞(mPSC)中半乳糖凝集素-1 (galectin-1)基因的沉默效应,并观察其对mPSC增殖的影响.方法:设计并合成3条alectin-1基因特异性RNAi靶序列,构建到慢病毒PLKO.1-PURO载体中.从慢病毒包装转染的293T细胞,获得病毒上清感染的mPSC；采用嘌呤霉素(2μg/μL)筛选出慢病毒感染成功的mPSC.实时荧光定量RT-PCR和Western印迹法检测mPSC中alectin-1 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测mPSC的增值能力.结果:PCR扩增和测序表明成功构建galectin-1慢病毒干扰载体,可以有效沉默mPSC中galectin-1基因的表达.构建的RNAi慢病毒载体感染mPSC后galectin-1 mRNA表达量同对照组比较,分别为(19.4±4.8)％、(6.2±4.3)％、(27.6±5.7)％,galectin-1蛋白表达量同对照组比较分别为(25.9±3.6)％、(10.8±4.1)％、(30.2±3.2)％.稳定的galectin-1沉默mPSC在第4天细胞增殖能力下降(22.9±2.7)％(P＜0.01).结论:构建的galectin-1RNAi慢病毒载体能显著降低mPSC中galectin-1的表达量,galectin-1沉默后mPSC增殖能力下降.