ImiS的表达、纯化及催化3类β-内酰胺类抗生素水解的动力学研究

• 作者: 冯吉利 冯雷 吴迪 杨科武 杨霞 程序 贾超 闫小艳 高会洲
• 来源期刊: 中国抗生素杂志
• 关键词: 细菌耐药 金属β-内酰胺酶ImiS β-内酰胺类抗生素 酶催化动力学
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 分离纯化与化学合成
• 页码范围: 197-200,216
• 分类号: R978.1+1
• 语种: 中文

摘要

目的:研究金属β-内酰胺酶(MBL)ImiS催化β-内酰胺类抗生素水解的动力学特征,为研发MBLs的通用型抑制剂提供实验数据.方法:在大肠埃希菌中表达ImiS,以SP-Sepharose离子交换层析柱纯化,通过MALDI-TOF MS测定其分子量,用UV-VIS测定ImiS催化法罗培南等3类6种β-内酰胺类抗生素水解的酶动力学参数,并考察不同pH、温度及底物浓度对酶活性的影响.结果:表征获得ImiS的分子量为25209Da,ImiS对法罗培南、青霉素G、氨苄西林及羧苄青霉素水解的催化常数K(cat)分别为(2.15±0.03),(0.85±0.03),(0.71±0.02)和(0.58±0.02)s(-1),对头孢三嗪和头孢噻肟无活性.底物为法罗培南时,ImiS最适活性的pH为7.5±0.1,在酸性环境中酶活性降低较为明显,最适活性的温度为(44.8+0.8)℃.结论:治疗携带ImiS的病菌引起的感染,使用法罗培南不妥,而头孢三嗪或头孢噻肟为合理.实验结果为ImiS抑制剂的设计与合成提供了很有价值的信息.