草酸和草酸钙结晶损伤肾小管上皮细胞的差异蛋白质组学研究

• 作者: 吴卫真 孙颖浩 徐廷昭 杨顺良 谭建明 陈书尚 高小峰
• 来源期刊: 中华泌尿外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肾小管上皮细胞 草酸 一水草酸钙 肾结石 蛋白组学
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 387-391
• 分类号: R322.61
• 字数: 3401字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6702.2011.06.009

摘要

目的 分析并鉴定草酸和一水草酸钙(COM)结晶损伤人肾小管上皮细胞(HK-2)后细胞蛋白质谱的表达变化,探讨肾小管上皮细胞受损在肾结石形成中的可能作用.方法 体外培养正常HK-2细胞至90%融合后,换无血清培养基,随机分为2组.实验组培养基内加入2 mmol/L草酸+200 mg/L COM结晶,37 ℃孵育.分别抽提2组细胞的总蛋白,双向凝胶电泳结合液相色谱-电喷雾离子阱质谱(LC-ESI-MS/MS)技术对2组中差异表达的蛋白质进行分离和鉴定.蛋白印迹法对鉴定出的蛋白进行验证.结果 成功建立细胞总蛋白的双向凝胶电泳图谱,经软件分析和质谱鉴定出差异蛋白质12个:FK506结合蛋白4、α-烯醇酶、M2型丙酮酸激酶、ATP合成酶α亚单位、3′,5′-二磷酸核苷酸酶1、核磷蛋白2、L-乳酸脱氢酶B、芽胞发芽蛋白3、Cofilin-1、Fascin、40S核糖体蛋白S17和胞液氨基肽酶1.差异蛋白涉及细胞能量代谢、细胞增殖、凋亡、钙离子通道活性调控、细胞运动及信号转导等多种生理活动.蛋白印迹法检测示HK-2细胞损伤后ENO1蛋白表达上调,而Cofilin-1表达下调,证实双向凝胶电泳和质谱分析可靠.结论 高浓度草酸和COM结晶可使正常人HK-2细胞蛋白表达发生改变,这些差异表达蛋白既可起到细胞的自我保护作用,又可能通过相应途径在肾结石的形成中起重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴卫真	南京军区福州总医院泌尿外科	102	443	10.0	16.0
2	杨顺良	南京军区福州总医院泌尿外科	100	411	10.0	15.0
3	谭建明	南京军区福州总医院泌尿外科	180	776	12.0	20.0
4	孙颖浩	第二军医大学长海医院泌尿外科	387	3365	22.0	44.0
5	高小峰	第二军医大学长海医院泌尿外科	49	880	16.0	28.0
6	徐廷昭	南京军区福州总医院泌尿外科	23	110	6.0	8.0
7	陈书尚	南京军区福州总医院泌尿外科	10	24	3.0	4.0