外环境样本中产毒型O1群霍乱弧菌双重荧光定量PCR快速检测方法的建立

• 作者: 包芳珍 卢亦愚 张政 徐丹戈 徐昌平 方叶珍 李剑 蒋雪凤 黄世旺
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 霍乱弧菌 双重荧光定量PCR 外环境 CT rfbO1
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 29-32,36
• 分类号: R378.3
• 字数: 3571字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2011.01.007

摘要

目的 研究建立双重荧光定量PCR技术快速检测产毒型O1群霍乱弧菌,并首次应用于外环境样本的检测中.方法 从GenBank上下载O1群霍乱弧菌O抗原编码基因rfbO1和毒力基因CT序列,在rfbO1和CT保守区域设计特异性引物和探针,建立优化单一和双重荧光PCR反应体系,评价所建双重PCR反应体系的特异性、敏感性和稳定性,并应用于外环境样本的监测检验中.结果 该方法对O1群霍乱弧菌检测具有高度特异性,对rfbO1和CT基因序列检出限达到1.0×102cfu/mL,构建的体系定量标准曲线相关系数分别为0.999和0.998,具有较好的稳定性,并首次从352件外环境样本中检测出了5株产毒型O1群霍乱弧菌.结论 本研究建立的双重荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速,可应用于外环境样本中产毒型O1群霍乱弧菌的大范围筛查.