RNA沉默LASS2基因促进人前列腺癌细胞体外侵袭及其机制研究

• 作者: 张波 徐晓艳 由江峰 裴斐
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: 前列腺肿瘤 肿瘤转移 基因,肿瘤抑制 RNA,小分子干扰
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 814-819
• 分类号: R394.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-167X.2011.06.006

摘要

目的:研究特异性沉默人源性长寿保障基因2(homosapiens longevity assurance homologue 2,LASS2,亦称TMSGI的小干扰RNA( small interfering RNA,siRNA)对人前列腺癌细胞系低转移潜能亚系PC-3M-2B4的体外侵袭能力的影响及相关机制.方法:通过脂质体转染法将特异性沉默LASS2基因的siRNA转染入PC-3M-2B4细胞.分别用实时荧光定量PCR(real-time fluorogenetic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western blot方法检测LASS2siRNA对PC-3M-2B4细胞LASS2基因和蛋白表达的抑制作用,筛选有效的siRNA片段；运用液泡型ATPases( vacuolar H+ -ATPases,V -ATPases)活性测定试剂盒来检测PC-3M-2B4细胞的V-ATPases活性；运用BCECF氢离子敏感荧光探针检测PC-3M-2B4细胞外氢离子浓度；采用Westem blot方法分析PC-3M-2B4细胞的基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)的表达及分泌情况；应用明胶酶谱法检测PC-3M-2B4细胞上清液中MMP-2的活性；利用细胞划痕修复实验和Transwell法检测细胞体外迁移及侵袭能力.结果:通过RFQ-PCR和Westem blot筛选后,siRNA-2能显著抑制PC-3M-2B4细胞LASS2基因mRNA和蛋白的表达,对mRNA表达的抑制率可达84.5％,对蛋白表达的抑制率可达60％.PC-3M-2B4细胞转染LASS2 siRNA-2后,其V-ATPases的活性及细胞外氢离子浓度明显升高,与空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)；MMP-2蛋白的表达及分泌无明显变化,但分泌的MMP-2的活性形式增加,与空白对照组相比明显提高,差异有统计学意义(P＜0.05)；且细胞的体外迁移及侵袭能力明显高于空白对照组(P＜0.05).结论:特异性siRNA沉默LASS2基因能促进入前列腺癌细胞体外侵袭能力,其机制与沉默LASS2基因后激活V-ATPase,从而使细胞外氢离子浓度升高,进而激活MMP-2有关,提示LASS2基因是一新的肿瘤转移抑制基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张波	北京大学基础医学院病理学系	152	883	16.0	23.0
2	裴斐	北京大学基础医学院病理学系	46	443	11.0	20.0
3	由江峰	北京大学基础医学院病理学系	42	372	11.0	16.0
4	徐晓艳	北京大学基础医学院病理学系	54	256	10.0	13.0