季节性流感病毒H1N1实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 秦川 许黎黎 鲍琳琳
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 季节性流感病毒H1N1 荧光定量PCR 病毒载量
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 62-66
• 分类号: R332
• 字数: 3753字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671.7856.2011.07.014

摘要

目的 建立一种快速定量检测季节性流感病毒H1N1核酸的实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒.方法 选择季节性流感病毒H1N1的保守基因NP基因作为检测靶目标,应用Clustal W软件进行序列同源性比对分析,筛选出季节性流感病毒H1N1特异性的保守序列作为引物候选区域,然后应用Primer Express及PrimerPremier 5.0软件包对候选引物进行进一步配对及筛选,得到最优特异性检测引物.同时,由病毒全长cDNA扩增出NP基因,琼脂糖凝胶电泳检测NP基因的扩增情况并对目的条带进行切胶回收及纯化,对回收后的NP全长基因进行核酸浓度测定,并换算成拷贝数,作为定量标准品.结果 应用ABI公司的Power SYBR Green PCR MasterMix及StepOne实时荧光定量PCR仪,该检测系统灵敏度可达10<'2> copies/μL,不同梯度标准品间线性关系(R<'2>)达0.999,斜率为-0.3433,扩增效率为95.572%,所有标准品均在83.2℃出现尖且窄的特异性熔解峰.结论 利用该检测系统可以快速定量检测季节性流感病毒H1N1,灵敏度高,可用作基础及临床实验室对季节性流感病毒H1N1感染的辅助诊断方法和临床效果的监测手段,对实验操作者要求相对较低,具有实际的应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	秦川		7	37	3.0	6.0
2	许黎黎		1	9	1.0	1.0
3	鲍琳琳		1	9	1.0	1.0