Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004株微型基因组的构建及其功能鉴定

• 作者: 刘华雷 张维 王志亮 管峰 赵云玲 郑东霞 陈云霞
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: Ⅰ类新城疫病毒 辅助性质粒 微型基因组 病毒拯救
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 27-31
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 3977字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2011.09.015

摘要

目的本研究旨在构建Ⅰ类新城疫病毒NDV08—004的微型基因组和辅助质粒，为构建病毒拯救体系奠定基础。方法根据Ⅰ类新城疫病毒NDV08—004的全基因组序列，采用SOE方法将增强绿色荧光蛋白基因（eGFP）插入NDV08—004的3’-Leader和5’-Trailer区域之间后反向插入转录载体pOLTV5中，构建了NDV08—004的微型基因组pLGT-03。将pLGT-03转染辅助病毒NDV08—004感染的表达T7RNA聚合酶BSRT7／5细胞进行功能鉴定。采用RT-PCR将NDV08-004的NP、P和L蛋白基因亚克隆入表达载体pCI-neo中，分别构建了三个辅助质粒pCI-NP、pCI-P、pCI—L。通过构建的微型基因组pLGT-03和三个辅助质粒按照一定的比例共转染BSRT7／5细胞来验证辅助质粒的功能。结果微型基因组pLGT-03转染辅助病毒感染的BSRT7／5细胞后可见明显荧光，表明微型基因组构建成功。微型基因组和辅助质粒共转染可见荧光表达，表明三个辅助质粒均具有相应的功能。结论表明微型基因组和辅助质粒均具有相应的功能，为建立NDV08-004的反向遗传操作平台奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘华雷		49	216	7.0	13.0
2	郑东霞		16	73	4.0	8.0
3	赵云玲		17	83	4.0	9.0
4	王志亮		134	936	18.0	25.0
5	张维		17	130	7.0	11.0
6	管峰		2	4	1.0	2.0