人TLR4胞外段的克隆、表达及功能活性分析

• 作者: 孙瑞利 张婧婧 张新富 杨景瑞 段巨洪 王凡平 王明永 郭庆合
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: TLR4胞外段蛋白 基因克隆 重组表达 功能活性
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 818-822
• 分类号: Q785
• 字数: 4494字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.09.013

摘要

目的:获得高纯度、高活性的人TLR4 胞外段蛋白.方法:采用PCR方法从含人TLR4 cDNA的质粒pCDNA3-TLR4中扩增人TLR4 胞外段基因片段,将其插入载体pET32a并导入大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达.用Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化融合蛋白.SDS-PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的相对分子质量和抗原性,ELISA和FCM鉴定其功能活性.结果:获得1 911 bp 的人TLR4 胞外段基因片段,构建成重组表达载体pET32a-TLR4并在大肠杆菌中表达.TLR4-Trx融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的12%,其纯度较高.ELISA和FCM检测显示,TLR4-TrX融合蛋白不仅与配体LPS结合,还能竞争性抑制LPS与THP1细胞结合.结论:所获TLR4-Trx融合蛋白纯度高,功能活性好,为进一步研究TLR相关的免疫调节机制提供物质基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭庆合	新乡医学院医学检验系	34	237	10.0	13.0
2	王明永	新乡医学院医学检验系	35	191	8.0	11.0
3	张婧婧	新乡医学院医学检验系	32	212	8.0	13.0
4	段巨洪	新乡医学院医学检验系	10	62	5.0	7.0
5	王凡平	新乡医学院医学检验系	30	147	7.0	10.0
6	张新富	新乡医学院医学检验系	6	45	4.0	6.0
7	杨景瑞	新乡医学院医学检验系	10	61	5.0	7.0
8	孙瑞利	新乡医学院医学检验系	8	50	4.0	7.0