小凹蛋白-1在脐静脉内皮细胞CaR介导NO生成中的作用和机制

• 作者: 何芳 孙志萍 王振焕 胡清华 邓峰美 钟华 陈雄英
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 小凹蛋白-1 人脐静脉内皮细胞 受体,钙敏感 一氧化氮
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 934-938
• 分类号: R364.1+4
• 字数: 4546字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.05.019

摘要

目的:探讨小凹蛋白-1(Cav-1)在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(CaR)介导NO生成中的作用和机制.方法:利用转染技术将构建的Cav-1干扰质粒(Cav-1 shRNA)转染入HUVECs,随机分为:(1) 对照组;(2)CaR激动剂 (精胺)组;(3) 精胺+Ca2+组;(4) CaR负性变构调节剂(Calhex231)+精胺组;(5) Calhex231+精胺+Ca2+组;(6) 非律平(filipin)+精胺组;(7) filipin+精胺+ Ca2+组;(8)空质粒 (vehicle)+精胺+Ca2+组;(9) Cav-1 shRNA+精胺组;(10) Cav-1 shRNA+精胺+Ca2+组.Western blotting检测Cav-1 shRNA转染后HUVECs中CaR和Cav-1蛋白表达,通过NO荧光探针DAF-FM DA负载HUVECs检测细胞内NO的生成;并在提供充足底物的条件下检测细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性.结果:Cav-1干扰后,Cav-1蛋白表达降低,同时 CaR的膜蛋白表达降低(P<0.05),CaR的浆蛋白表达无变化(P>0.05).无论细胞外为零钙液或含钙液时,精胺(2 mmol/L)刺激CaR时均引起eNOS活性和NO含量增加(P<0.05),其中细胞外液为含钙液时,eNOS活性和NO含量增加较细胞外为零钙液时更明显(P<0.05),Calhex231 (1 μmol/L)可阻断(细胞外为零钙液)或降低(细胞外液为含钙液) 精胺介导的上述作用 (均P<0.05);此作用亦可被filipin (1.5 mg/L)或Cav-1基因沉默减弱(细胞外液为含钙液) (均P<0.05).结论:HUVECs中Cav-1对CaR介导的NO生成有促进作用,其机制可能与Cav-1影响CaR膜定位及对激动剂反应性有关.