小凹蛋白-1下调人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流的作用机制

• 作者: 何芳 吴玲玲 孙志萍 王静 赵慧 邓峰美 钟华 龚艳
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 小凹蛋白-1 人脐静脉内皮细胞 受体,钙敏感 钙信号
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 577-583
• 页数: 7页
• 分类号: R363
• 字数: 5548字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2013.04.001

摘要

目的:研究小凹蛋白-1(Cav-1)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞外钙敏感受体(CaR)介导钙内流的作用机制.方法:取2～3代HUVECs,采用细胞膜穴样凹陷(caveolae)结构破坏剂非律平(filipin)和甲基-β-环糊精(MβCD)及Cav-1基因沉默,配合CaR激动剂精胺(spermine)和负性变构调节剂Calhex 231.Fura-2/AM负载检测细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i).Western blotting检测HUVECs中Cav-1以及CaR蛋白表达,免疫共沉淀技术检测Cav-1和CaR相互作用.用蔗糖密度梯度离心的方法提取并鉴定caveolae,Western blotting检测caveolae的标志蛋白Cav-1和浮舰蛋白1(flotillin-1)及CaR表达.同时检测胞膜、胞浆和高尔基体标志蛋白:转铁蛋白受体(TfR)、β-肌动蛋白(β-actin)和β-外被体蛋白(β-COP).检测富含Cav-1膜(CEM)区、非caveolae Ⅰ区(NCF Ⅰ)和Ⅱ区(NCF Ⅱ)的Cav-1和CaR表达.结果:(1)细胞外液为含钙液时,Calhex 231完全阻断精胺刺激引起的[Ca2+]i升高(P＜0.05),MβCD可加强精胺升高[Ca2+]i的作用(P＜0.05).不同浓度MβCD处理后各组Cav-1和CaR相互作用的差异无统计学意义(P＞0.05)；(2)免疫共沉淀结果显示,各组Cav-1和CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P＞0.05)；(3)与control组比较,spermine+ Ca2+组、filipin+ spermine+Ca2+组和MβCD+ spermine+ Ca2+组CEM区的Cav-1和CaR蛋白表达均降低(P＜0.05),NCF Ⅰ区的Cav-1和CaR蛋白表达增加(P＜0.05),NCF Ⅱ区Cav-1蛋白表达增加(P＜0.05),而CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P＞0.05).结论:在HUVECs中,Cav-1和CaR共定位于同一caveolae区,同时Cav-1对CaR介导的Ca2内流有下调作用,其机制可能与Cav-1抑制CaR膜定位、促使其向非caveolae区转位及减弱其对激动剂的反应性有关.