特异性小干扰RNA下调中期因子基因表达对黑素瘤细胞黏附和侵袭的影响

• 作者: 周永静 彭辉勇 范钰 邱志远 龚丹丹
• 来源期刊: 中华皮肤科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 黑色素瘤,实验性 细胞系,肿瘤 中期因子 RNA,小分子干扰
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 497-500
• 分类号: R739.5
• 字数: 2491字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2011.07.011

摘要

目的 探讨中期因子(midkine,MK)基因小干扰RNA(siRNA)对黑素瘤细胞侵袭的影响.方法 根据MK基因mRNA序列特点,设计并用化学方法合成3个siRNA,转染人黑素瘤A375细胞后,以荧光实时定量PCR方法筛选出效果最好的siRNA,以此siRNA转染人黑素瘤A375细胞.同时设空白对照组(不予任何处理)和空载对照组(仅用脂质体转染).分别以荧光实时定量PCR和Western印迹方法观察MK基因mRNA和蛋白水平,然后以噻唑蓝法检测细胞黏附率,以Boyden小室模型方法检测细胞侵袭力.结果 所设计的siRNA均能有效下调MK基因mRNA表达水平,以S3号作用最强.以该siRNA转染A375细胞后,荧光实时定量PCR结果显示,转染组A375细胞MK基因mRNA水平明显下降,且呈浓度(24 h时r=-0.906;48 h时r=-0.922;72 h时r=-0.939,P均<0.01)和时间(3.125 nmol/L r=-0.889;6.25 nmol/L r=-0.935;12.5 nmol/L r=-0.928,P均<0.01)依赖性.细胞黏附试验显示,3.125、6.25和12.5 nmol/L siRNA组黏附率分别为73.66%±2.25%、49.36%±2.16%和28.35%±1.68%,呈浓度依赖性下降(r=-0.936,P<0.01).Boyden小室试验结果显示,3.125、6.25和12.5 nmol/L siRNA组穿过滤膜的细胞数分别为23.9±1.6、12.1±1.5、5.6±1.2,而空白对照组为36.8±1.5,穿膜细胞数呈浓度依赖性下降(r=-0.915,P<0.05).结论 MK基因在黑素瘤细胞黏附、侵袭中发挥重要作用;以siRNA转染黑素瘤细胞抑制该基因表达可抑制黑素瘤细胞黏附、侵袭能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范钰	江苏大学附属人民医院肿瘤研究所	149	699	13.0	18.0
2	龚丹丹	江苏大学附属人民医院肿瘤研究所	22	63	4.0	6.0
3	邱志远	江苏大学附属人民医院肿瘤研究所	16	87	6.0	8.0
4	周永静	江苏大学附属人民医院肿瘤研究所	30	86	5.0	7.0
5	彭辉勇	江苏大学附属人民医院肿瘤研究所	17	53	5.0	6.0