急性乙肝患者HBV特异性CD8T细胞受体基因的克隆分析

• 作者: 丁宁 刘妍 叶海燕 徐东平 范振平 赵平 邹正升 靳雪源 黄丽利
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎,乙型,急性 表位,T淋巴细胞 受体,抗原,T细胞
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 490-493,504
• 分类号: R512.62
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨急性乙肝患者HBV特异性CD8 T细胞受体(TCR)参与免疫应答的分子机制.方法 分离HLA-A2阳性急性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMCs),用荧光标记的CD3、CD8抗体和五聚体染色、流式细胞仪检测HBsAg183-191和HB-sAg335-343特异性CD8 T细胞频率.取6例患者PBMCs,用HBsAg335-343表位多肽诱导培养3～4周,用磁珠分选出CD8 T细胞后再用流式细胞术分选HBV特异性CD8 T细胞,经IL-2/CD3抗体/CD28抗体扩增后提取细胞mRNA,用cDNA 5'末端快速扩增技术获取TCR分子α链和β全长可变区基因片段并进行克隆和测序,每个样本的克隆测序数≥50个.确定TCR α、β链基因家族并比较CDR3区序列特点.结果 6例患者样本600多个TCRα、β链克隆基因序列分析结果表明,HBV特异性CD8 T细胞均呈现TCR分子α、β链基因家族优势表达特点,每例患者样本以2～4种α链和1～4种p链家族为主,其中α2、214、a15、β3、613和23链家族同时出现在1例以上患者,有1例患者所有克隆分析的β链基因均为1313家族.同一患者同一家族α、β链CDR3区序列趋于一致,而不同患者同一家族α、β链CDR3区序列相差较大.结论 经HBV抗原表位多肽诱导增殖的特异性CD8 T细胞具有明显的TCR α、β链取用优势特点,这种TCR链的优势表达特点可能是影响抗HBV感染特异性细胞免疫力的重要分子基础.