流式细胞术辅助筛选和纯化人缺氧诱导因子-1α基因沉默肝癌细胞株

• 作者: 危群 李志伟 楚青 江萍 王燕 陆晓青
• 来源期刊: 昆明医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 缺氧诱导因子-1a RNA干扰 流式细胞术
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 20-25
• 分类号: R735.3
• 字数: 4878字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-4706.2011.04.006

摘要

目的 利用流式细胞术(FCM)协助筛选、纯化RNA干扰(RNAi)效率高的人缺氧诱导因子1-α(HIF-1α)基因沉默肝癌细胞株.方法 选择带Neor及GFP基因的质粒pGenesil-1.1构建HIF-1α靶向小干扰RNA(siRNA)重组表达载体,转染人肝癌细胞株SMMC7721.首先用G418筛选,然后用FCM检测出常氧、缺氧条件下HIF-1α蛋白表达抑制效率最高的转基因细胞株.根据FCM可分选GFP阳性细胞这一特点,进一步用流式细胞分选仪分选纯化转基因细胞,最后用PCR和免疫组化方法鉴定纯化细胞株的HIF-1α干扰效率.结果 单用G418筛选HIF-1α干扰组细胞最高筛选效率为32.9%,FCM检测HIF-1α蛋白抑制率为78.7%～92.8%;合并使用G418和FCM分选纯化后,最佳HIF-1α干扰组筛选效率达94.4%,常氧、缺氧条件下对HIF-1αmRNA表达抑制率分别为95.5%、85.2%.结论 合并使用G418及FCM分选纯化得到了高RNAi效率的人HIF-1α基因沉默肝癌细胞株,为进一步研究HIF-1α与肝癌关系及靶向HIF-1α的肝癌基因治疗提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陆晓青	昆明医学院第二附属医院中心实验室	14	92	4.0	9.0
2	江萍	昆明医学院病理教研室	13	27	3.0	5.0
3	危群	昆明医学院第二附属医院病理科	19	56	3.0	7.0
4	王燕	昆明医学院第二附属医院病理科	23	55	4.0	6.0
5	李志伟	昆明医学院第二附属医院中心实验室	3	4	1.0	2.0
6	楚青	昆明医学院第二附属医院中心实验室	1	1	1.0	1.0