镉离子单克隆抗体的制备及其阻断ELISA检测方法的建立

• 作者: 刘耀东 姜金庆 张海棠 王淑云 王申锋 王自良
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 镉 人工抗原 抗体,单克隆 酶联免疫吸附测定
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 208-212
• 分类号: R392.33
• 语种: 中文

摘要

目的 制备重金属镉离子(Cd2+)单克隆抗体,并建立Cd2+残留阻断ELISA检测方法.方法 用异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)螯合Cd2+合成Cd-ITCBE半抗原,异硫氰酯法制备免疫抗原Cd-ITCBE-BSA和检测抗原Cd-ITCBE-OVA,并进行鉴定;用Cd-ITCBE-BSA免疫BALB/c小鼠,经细胞融合后,间接ELISA和阻断ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备Cd2+单抗,并进行鉴定;建立检测Cd2+残留的阻断ELISA法,并进行验证.结果 Cd-ITCBE-BSA和Cd-ITCBE-OVA中BSA与OVA含量分别为7.1和6.7 mg/ml,Cd2+含量分别为191.7和130.1μg/ml;共筛选出1A3、287、2E10、4F3 4株杂交瘤细胞,其中2E10株分泌的cd舢单抗效价最高,细胞培养上清和腹水的间接ELISA效价分别达1:4.32×102和1:5.12×105,亲和常数(Ka)也最高,为7.58×108 L/mol,对Cd2+的半数抑制浓度(IC50)为16.3μg/L;建立的阻断ELISA法的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合;最低检测限为5μg/L;饲料样、猪尿样的平均添加回收率分别为92.9%和88%,平均变异系数分别为12.35%和12.45%;与Hg2+的交叉反应率为96.5%,与其他化合物未见交叉反应;试剂可在4℃保存180 d.结论已成功制备了高亲和力的Cd2+单抗,并建立了快速、简便、敏感、特异的Cd2+残留阻断ELISA检测方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜金庆	河南科技学院动物科学学院	84	358	11.0	15.0
2	张海棠	河南科技学院动物科学学院	114	750	15.0	21.0
3	王自良	河南科技学院动物科学学院	141	803	15.0	20.0
4	王淑云	河南科技学院新科学院	14	77	5.0	8.0
5	刘耀东	河南科技学院动物科学学院	3	21	3.0	3.0
6	王申锋	河南农业职业学院动物科学系	22	56	5.0	6.0