Cbl-b shRNA稳定转染乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建

• 作者: 刘云鹏 张凌云 张晔 曲秀娟 滕月娥 石晶
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺肿瘤 Cbl-b 短发夹环RNA MDA-MB-231 转染
• 年，卷（期）: 2011,（52）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 31-33
• 分类号: R737.9
• 字数: 2080字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2011.52.016

摘要

目的 构建靶向Cbl-b基因的短发夹环RNA(shRNA)真核质粒表达载体,建立Cbl-b shRNA稳定转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞系,为探讨Cbl-b的生物学功能奠定基础.方法 设计Cbl-b shRNA序列BLAST进行同源性分析.化学合成法合成shRNA序列,将配对的单链合成双链,以T4连接酶连接于pSilencerTM 4.1-CMV表达载体,加入感受态细胞.将菌液涂布于含有氨苄青霉素的LB平板,筛选阳性菌落,测序确认后进行大量复制、扩增,提取重组质粒.脂质体法将上述质粒转染至MDA-MB-231细胞中,G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系.结果 DNA测序证实靶向Cbl-b基因的shRNA真核质粒表达载体构建正确,G418压力筛选出阳性克隆,Western blot检测发现MDA-MB-231/Cbl-b shRNA转染细胞株中Cbl-b蛋白表达水平明显下调.结论 成功构建了基因沉默Cbl-b的MDA-MB-231细胞株,为进一步探讨其生物学功能奠定实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘云鹏		299	1742	18.0	25.0
2	滕月娥		56	360	10.0	16.0
3	张晔		62	306	10.0	14.0
4	曲秀娟		107	483	12.0	15.0
5	张凌云		24	127	5.0	11.0
6	石晶		36	200	8.0	13.0