双重PCR技术检测马铃薯环腐病菌和黑胫病菌方法的建立

• 作者: 朱杰华 杨志辉 赵冬梅 韩广涛 韩彦卿
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 马铃薯 环腐病菌 黑胫病菌 双重PCR 分子检测
• 年，卷（期）: 2011,（20）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 4199-4206
• 分类号: S435.32
• 语种: 中文

摘要

[目的]利用双重PCR技术快速检测马铃薯环腐病菌(Clavibacter micchiganens is subsp.sepedonicus)和黑胫病菌(Pectobacterium atroseptica).[方法]根据GenBank上发表的马铃薯环腐病菌pCS1质粒上纤维素酶A基因序列,对比近缘种及马铃薯上几种重要病原菌的核苷酸序列,设计并合成了1对特异性引物CMS1/CMS2,将设计的引物与已发表的PCR检测马铃薯黑胫病菌特异性引物ECA1f/ECA2r结合,经过条件优化后,建立了双重PCR体系.[结果]利用引物CMS1/CMS2扩增出了1条913 bp的马铃薯环腐病菌特异性条带.检测灵敏度在DNA水平上达100 fg·μ L-1,在细菌数上达105CFU.mL-1.利用双重PCR体系对马铃薯环腐病菌和黑胫病菌进行扩增,可获得913和690 bp的2条特异性条带.检测灵敏度在DNA水平上达600 fg·pL-1,在细菌数上达5×105 CFU·mL-1.[结论]成功建立了双重PCR检测马铃薯环腐病菌和黑胫病菌技术体系,该技术能够同时快速可靠地检测出马铃薯环腐病菌和黑胫病菌.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩彦卿	中国农业大学农学与生物技术学院	1	18	1.0	1.0