大蕉枯萎病菌二重PCR分子快速检测技术的建立

• 作者: 曾莉莎 王芳 周海琪 伍泽星 赖永超 傅长根 吕顺 梁少丽 刘丽琴
• 来源期刊: 南方农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大蕉 枯萎病菌 尖孢镰孢菌古巴专化型 二重PCR检测
• 年，卷（期）: 2024,（8）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种 种质资源 分子生物学
• 页码范围: 164-171
• 页数: 8页
• 语种: 中文

摘要

【目的】基于大蕉枯萎病菌2个不同分化谱系特有的基因序列，建立大蕉枯萎病菌的二重PCR分子快速检测技术，为该病害预测及有效防控提供理论依据。【方法】基于大蕉枯萎病菌特有的r DNA基因间隔区（IGS）序列设计得到多对PCR引物，分别以广东3个粉蕉枯萎病菌株和8个大蕉枯萎病菌株、2个广西和海南的粉蕉枯萎病菌株、5个其他尖孢镰孢菌菌株和5个外围菌株的基因组DNA为模板进行PCR扩增，基于扩增结果从中筛选出大蕉枯萎病菌特异性引物，对其特异性和灵敏度进行检测，并确定二重PCR检测体系的含菌量检测下限。【结果】基于大蕉枯萎病菌特有的基因序列设计得到多对PCR引物，经筛选验证获得2对可用于检测大蕉枯萎病菌2个不同谱系（LineageⅠ和Ⅱ）的特异性引物，可直接应用于大蕉种植土壤和植株中的大蕉枯萎病菌检测，扩增片段分别为755和590 bp。当扩增条带为755 bp时，表明样本中含有大蕉枯萎病菌；当扩增条带为590 bp时，表明样本中含有粉蕉或大蕉枯萎病菌。建立的二重PCR检测体系检测大蕉枯萎病菌菌丝的灵敏度可达0.4μg，检测土壤的含菌量下限为每克土壤40个病原菌孢子。【结论】建立的二重PCR检测技术实现一次PCR反应同时检测并区分大蕉枯萎病菌2个谱系及广东地区的粉蕉枯萎病菌优势菌群，可用于无病大蕉和粉蕉种苗及种植土壤的检测与筛选。