单纯疱疹病毒1型US12基因siRNA筛选及其对病毒增殖的影响

• 作者: 任哲 向阳飞 张佩琢 张庶民 戚仁斌 李深 王一飞 王巧利 胡巢凤 陆大祥
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: siRNA RNA干扰 基因,US12 单纯疱疹病毒1型
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 页码范围: 528-532
• 分类号: R363
• 字数: 3494字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.03.021

摘要

目的:筛选高效沉默单纯疱疹病毒1型(HSV-1) US12基因的siRNA,研究siRNA沉默US12基因后对HSV-1增殖的影响.方法:构建pEGFP-N1-US12融合表达质粒,设计并化学合成3对靶向US12基因的siRNA,与pEGFP-N1-US12融合表达质粒共转染Vero细胞,流式细胞术筛选高效抑制pEGFP-N1-US12融合蛋白的siRNA,实时荧光定量PCR检测siRNA对细胞内US12 mRNA表达水平的抑制效果,空斑减数实验评价siRNA对HSV-1增殖的抑制效果.结果:共转染实验筛选出高效抑制pEGFP-N1-US12融合蛋白的siRNAS121、siRNAS122及siRNAS123.3对siRNA均能显著降低感染细胞US12 mRNA的表达水平,但空斑减数实验均未发现3对siRNA对HSV-1的增殖有显著抑制效果.结论:成功构建pEGFP-N1-US12融合表达质粒,筛选到高效抑制US12基因表达的3对siRNA,但是对病毒的体外增殖无显著影响,表明US12表达的立即早期蛋白ICP47的功能可能与HSV-1体外增殖无直接相关.