人单纯疱疹病毒1型VP22介导的microdystrophin重组腺病毒的构建及其蛋白转导特性

• 作者: 刘正山 张成 李勇 潘永飞 熊符 肖少波 许勇峰 郑卉
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: VP22 microdystrophin 腺病毒 假肥大型肌营养不良症
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 498-505,封3
• 页数: 9页
• 分类号: R730.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-503X.2008.04.027

摘要

目的 构建含有人单纯疱疹病毒1型(HSV-1)VP22与人microdystrophin基因融合的重组腺病毒,体外感染成肌细胞C2C12,探讨VP22对microdystrophin基因在成肌细胞中的蛋白转导特性.方法 设计引物,从质粒pSIN-rep5-VP22中扩增VP22全长基因,然后将VP22基因定向插入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,获得重组质粒pCMV-VP22:再用Not I酶切含microdystrophin基因的pBSK-micro质粒.获得microdystrophin基因,片段回收后定向插入重组质粒pCMV-VP22,获得重组质粒pCMV-VP22-MICDYS.Pmel线性化重组质粒pCMV-VP22-MICDYS,去磷酸化后回收与腺病毒骨架质粒pAdeany-1共电转化BJ5183感受态细胞.同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒,脂质体介导转染293细胞,通过观察293细胞病变及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组腺病毒.将含VP22-microdystrophin及microdysfrophin的病毒上清分别转染成肌细胞C2C12,通过RT-PCR、Western-blot和免疫组织化学方法检测microdys-m)phin的mRNA及蛋白表达.结果 成功构建了含有VP22-microdystrophin基因的重组腺病毒,体外感染成肌细胞C2C12,Westem-blot及免疫组织化学检测显示VP22显著提高了microdystrophin蛋白在C2C12细胞中的表达.结论 含有VP22-micrody8trophin基因的重组腺病毒载体的构建及VP22介导microdystrophin在成肌细胞C2C12间的转导,为利用此病毒进行假肥大型肌营养不良症疾病的治疗研究奠定了基础.