靶向MRP1基因的shRNA稳定逆转肺癌的多药耐药性

• 作者: 刘迁 崔婷婷 张伟伟 李爽 谢振丽 贾红双 邵淑丽 陈丽 陈薇薇
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 短发夹RNA 多药耐药 多药耐药相关蛋白1 RNA干扰 A549/DDP细胞
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2265-2269
• 分类号: R734.2
• 字数: 3978字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.12.005

摘要

目的:利用短发夹RNA(shRNA)表达载体逆转肺癌细胞株(A549/DDP)的多药耐药性.方法:构建2个多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因特异的shRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-MRP1,稳定电转染A549/DDP细胞,实时荧光定量PCR分析MRP1 mRNA的表达,免疫荧光检测细胞MRP1蛋白的表达,流式细胞术检测细胞内罗丹明123(Rho123)的潴留情况.MTT法检测细胞活力.结果:成功构建了shRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-MRP1,稳定转染sh-MRP1-2.1-1和sh-MRP1-2.1-2后,A549/DDP细胞MRP1 mRNA和蛋白表达均显著降低,细胞内Rho123相对荧光强度由16.93%±0.58%分别升高至89.02%±0.59%和82.56%±1.37%;A549/DDP亲本细胞顺铂的 IC50分别由(101.45±0.64)μmol/L降至(38.06±0.05)μmol/L和(53.72±0.36)μmol/L,5-氟尿嘧啶的IC50分别由(263.20±2.00)μmol/L降至(98.82±1.16)μmol/L和(141.81±0.49)μmol/L.结论:shRNA干扰表达载体pSilencer 2.1-U6 neo-RMP1能够稳定、持久地抑制MRP1基因,有效地逆转了A549/DDP细胞的多药耐药性.