表达大鼠融合蛋白NKX2.5-pEGFP的骨髓间充质干细胞的建立

• 作者: 张以忠 朱安峰 杨淑艳 赵东海 赵丽微 钟秀宏
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 NKX2.5基因 增强型绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 670-674
• 分类号: R361
• 语种: 中文

摘要

目的:构建大鼠NKX2.5融合绿色荧光蛋白真核表达质粒NKX2.5-pEGFP,并筛选表达大鼠融合蛋白NKX2.5—pEGFP的骨髓间充质干细胞(MSCs),为后续性细胞和基因治疗心肌梗死提供理论基础.方法:提取胎鼠心肌细胞总RNA,RT-PCR扩增获得大鼠NKX2.5基因,将目的基因克隆到pEGFP-N3载体并获得重组后NKX2.5-pEGFP质粒.采用密度梯度离心法联合贴壁法分离骨髓单个核细胞并获得MSCs.将重组质粒NKX2.5-pEGFP以Lip02000转染到大鼠MSCs,G418筛选2周.蛋白免疫印记和荧光检测重组后质粒在骨髓间充质干细胞中的表达情况.结果:电泳检测证实经RT-PCR获得NKX2.5基因大小为981 bp,与理论值相符.NKX2.5- pEGFP重组质粒经BamH Ⅰ、Sal Ⅰ双酶切,PCR鉴定得到2条大小约为981和4 700 bp的酶切片段,鉴定结果与预期结果完全一致.蛋白免疫印记检测到转染重组质粒的MSCs中有相对分子质量为65 000的蛋白表达,与理论值相符.荧光检测NKX2.5-pEGFP重组质粒转染的MSCs中可见绿色荧光,证实表达阳性.结论:成功建立表达大鼠NKX2.5-pEGFP基因的MSCs.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱安峰	吉林省长春市中心医院病理科	7	10	2.0	2.0