内蒙古白绒山羊蛋白激酶B/AKT基因的克隆及表达模式分析

• 作者: 刘东军 史偈君 张涛 杨娇馥 梁燕 王志钢 秦毅 郑旭
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 内蒙古白绒山羊 AKT 基因克隆 表达模式分析
• 年，卷（期）: 2011,（13）
• 所属期刊栏目: 畜牧·资源昆虫
• 页码范围: 2787-2795
• 分类号: S827.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.13.017

摘要

[目的]克隆内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA并分析其基本表达模式.[方法]RT-PCR克隆 AKT 基因cDNA.通过在线软件BLAST进行核酸序列分析,用SMART与Psite进行氨基酸序列分析.半定量RT-PCR检测AKT基因在绒山羊组织中的表达特异性.Western blotting检测绒山羊胎儿成纤维细胞中AKT表达.[结果]克隆到的内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA片段长 1443 bp,包含了编码480个氨基酸残基的全长ORF,氨基酸序列与绵羊(NM-001161857.1)同源性为97%.SMART分析表明,ORF编码的蛋白包含了可与3-磷酸肌醇结合的PH结构域及具有丝氨酸/苏氨酸激酶催化活性的S-TKc结构域.Psite分析表明,含有1个cAMP-/cGMP-依赖性蛋白激酶磷酸化位点、6个蛋白激酶C磷酸化位点、10个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个蛋白激酶ATP结合区信号和1个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性区域.PSORT程序预测其定位于细胞质中.AKT基因mRNA丰度在睾丸、脑和肾中较高,在脾、肝、肺及乳腺组织中相对低.绒山羊胎儿成纤维细胞中抑制mTOR活性,AKT表达量降低.[结论]内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA全长ORF的核苷酸序列与绵羊的AKT基因具有很高的同源性,AKT基因在脾、睾丸、脑、肝、肺、乳腺及肾组织中均有表达,其AKT的表达受mTOR信号通路的调控.