破伤风毒素C片段在乳链菌内的表达

• 作者: 姜泊 孙大勇 杨晓强 赵亚刚 陈学清
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: 破伤风毒素C片段 乳链菌 生物佐剂 疫苗
• 年，卷（期）: 2011,（13）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1644-1647
• 分类号: R979.1
• 字数: 3835字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2011.13.002

摘要

目的 构建破伤风毒素C片段(TETC)乳链菌表达载体,并验证其生物活性.方法 将采用基因拼接方法 获得的TETC基因从测序正确的质粒pBS-TETC上以Sal Ⅰ、Hind Ⅲ切下,分别定向连接到以Xho Ⅰ、Hind Ⅲ 酶切的质粒分泌表达的乳链菌表达载体pNBC1000和膜锚定表达的乳链菌表达载体pNBC2000.电穿孔转化乳链菌,分别提取分泌蛋白及膜锚定蛋白,通过蛋白电泳及Western blot检测蛋白定位表达情况.结果 构建了分泌表达及锚定表达TETC的乳链菌表达载体pNBCL1002与pNBCL2002,电穿孔转化乳链菌获得了分泌表达及膜锚定表达TETC的乳链菌,SDS-PAGE分析显示分泌表达的TETC大小约为57.8 kD,表达量占总体蛋白的8.06%、上清蛋白的9.82%,锚定表达的TETC大小约为73.5 kD的表达蛋白,表达量占总体蛋白的10.7%、膜蛋白的17.9%; Western blot检测显示所表达的TETC均可与破伤风抗毒素血清发生免疫印迹.结论 成功构建了TETC乳链菌表达载体并在乳链菌内表达TETC,初步验证了表达的TETC的免疫反应性,这一结果 可能为进一步研究生物佐剂及防治破伤风疫苗奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙大勇	广州军区广州总医院消化内科	93	467	10.0	18.0
2	赵亚刚	广州军区广州总医院消化内科	99	435	10.0	15.0
3	姜泊	南方医科大学南方医院消化内科	161	1166	17.0	25.0
4	陈学清	广州医学院第一附属医院消化内科	15	81	5.0	8.0
5	杨晓强	中国人民解放军75600部队医院综合科	3	29	2.0	3.0