荧光定量聚合酶链反应检测血液制品中细菌污染方法的建立

• 作者: 严力行 吕杭军 和艳敏 应燕玲 朱发明 许先国 陶苏丹
• 来源期刊: 中华医院感染学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血液细菌污染 荧光定量聚合酶链反应 分子诊断
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 205-208
• 分类号: R446.1
• 语种: 中文

摘要

目的 建立快速检测血液制品中细菌污染的荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法. 方法 以大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌分别作为革兰阴性菌和革兰阳性菌代表菌,模拟不同程度细菌污染的血液标本,利用3种不同抽提方法提取细菌基因组DNA进行荧光定量PCR(FQ-PCR);以大肠埃希菌系列浓度梯度基因组DNA为模板建立标准曲线,将14株不同菌株模拟细菌污染的血液标本进行FQ-PCR检测. 结果 根据Ct值和扩增效果,3种基因组抽提方法中以DNA过柱纯化法效果最佳;以大肠埃希菌梯度稀释(1.2×108)～(1.2×102)CFU/ml进行FQ-PCR反应,得到标准曲线为Y=-0.2211X+8.80(R2=0.998);14株不同细菌均能在103 CFU/ml检测出阳性,但Ct值差异有统计学意义. 结论 建立了检测血液制品中细菌污染的荧光定量诊断技术,该方法快速可靠,在预防和诊断输血相关性细菌污染上具有一定的应用价值.